液體培養基中細菌培養實驗步驟

　　實驗步驟

　　一、過夜培養

　　1.  將5 ml預熱的液體培養基移入一無菌的16 mm或18 mm管中。

　　2.  用接種環挑一個單菌落，浸沒于培養液中并輕輕振動接種環，使待接種的細菌分散在培養液中。

　　3.  蓋好試管，在搖床或轉鼓式培養裝置上以60 r/min速度，于37°C培養至飽和（1X109~ 2X109 細胞 /ml，>6 h）。

　　二、大體積培養

　　1.  在一無菌的Erlenmeyer或baffle瓶中，用新鮮預熱的培養液按I1: 100的比例稀釋過夜培養物，燒瓶的體積應該是培養液體積的5倍以上。

　　如果不搖動培養，所用燒瓶的體積應比培養液體積大20倍以上，以確保足夠的通氣。

　　2.  37°C，劇烈搖動培養（約300 r/min)。

　　三、利用計數板監測生長情況

　　1.  用一片干凈的蓋玻片蓋住一片干凈的計數玻片（或者血球計)。

　　2.  小心地將一小滴培養液滴到蓋玻片的邊緣，這樣培養液可擴散人蓋玻片下。

　　3.  在相差顯微鏡400倍下觀察，并且按一個小方塊中所見的每個細菌大約相當于2X107 細胞/ml計算細菌濃度。

　　四、利用分光光度計監測生長情況

　　因為儀器的差異性，分光光度計應該用一已知濃度的培養液進行校準。

　　1.  測OD600。為了獲得一個準確的讀數，稀釋培養液至OD600＜1。

　　2.  按每0. 1 OD值大約相當于108 細胞/ml計算細菌濃度。